免疫组织化学技术范文

[关键词]空气喷砂技术;牙髓组织;P物质;降钙素基因相关肽;疼痛

[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2010)04-0529-03

Thestudyofair-abrasiontechniquetothepulptissuesubstancePinrats

ZHANGXin,LIUYan-li,LIULi-juan,LIQin

(DepartmentofStomatology,Xi'anCentralHospital,Xi'an710004,Shaanxi,China)

Abstract:ObjectiveToobservethechangeofthesubstancePandpulpCalcitoninGene-relatedPeptideimmunoreactivefirbresinthepulpofrat.MethodsAirabrasiontechniqueandhigh-speedturbineunitsasexperimentalgroup,nosystemofholesinratasthecontrolgroup.MaxillarymolarsoffemaleSDratswereprepared.ABCimmunohistochemicalstainingsubstancePwithinthepulptissue.ResultsTheratsinAirabrasiongrouphavedentalpulpSP,CGRPstrongpositivestaining.Otherwise,theratsinHigh-speedturbinegrouphavedentalpulpSP,CGRPweakpositivestaining.Theexperimentalgroups,theexperimentalgroupandcontrolgroupweredifferent,thedifferencewithatotalsignificance(P

Keywords:airabrasiontechnique;pulptissue;substanceP;calcitoningene-relatedpeptide;pain

空气喷砂技术作为一种无痛治疗新技术,是一种非机械窝洞预备方法,简称KCP(KineticCavityPreparationSystems)。该技术最早出现于二十世纪四、五十年代,1945年Black首次报道了这种技术。它的工作原理是利用氧化铝颗粒的流动引起动力学能量来切削牙体组织[1]。这种能量作用在牙体上,震动和压力都非常小。由于切削功率高并有压缩空气冷却,无热量储蓄,对牙髓的刺激也很小。SP(SubstanceP)是世界上最早发现的神经肽之一,广泛的分布于牙髓组织中,源于三叉神经节,存在于牙髓感觉神经C纤维中,在牙髓痛觉传导反应中起一定的作用[2]。牙髓受到伤害性刺激后,牙髓神经纤维兴奋,在神经末梢释放SP,CGRP等神经肽,从而刺激免疫活性细胞,促进局部免疫防御反应。本研究的目的就是研究空气喷砂制洞技术对牙髓组织痛觉神经SP、CGRP的影响。

1材料和方法

1.1抗体:兔抗SP血清(1:150,博士得生物技术有限公司);兔抗CGRP血清(1:150,博士得生物技术有限公司);SP复合物(1:100,ZYMED);羊抗兔二抗(博士得生物技术有限公司);

1.2方法:实验用雌性SD大鼠,体重150～200g。分两个实验组与一个对照组:①正常大鼠(n=4),作为对照组;②空气喷砂组(n=8);③高速涡轮机组(n=8)。稀释的846合剂(第四军医大学西京医院实验动物中心提供)后肢肌肉注射,0.45ml/100g。待动物麻醉后,空气喷砂技术对动物上颌第一磨牙制洞,洞的大小为1/2小球钻直径,其对侧高速涡轮机同法制洞,对照组不进行任何处理。5min后,立即开胸,经心脏灌注含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸缓冲液,1.5h。取大鼠上颌骨并置于4%多聚甲醛固定24h。固定结束后,将上颌骨放入Krinstense中,4℃脱钙两周,将脱钙的上颌骨放入20%的蔗糖溶液中,4℃放置48h。恒冷箱切片机切片,片厚40μm,收集到0.01mol/LPBS中浸泡,行ABC免疫组织化学染色。

2结果

光镜下SP、CGRP阳性神经纤维为棕色(图1～3),实验组间、实验组与对照组间区别明显。

2.1空气喷砂机组:空气喷砂技术损伤性刺激后可见牙髓组织中SP/CGRP免疫阳性神经纤维变化。在上颌第一磨牙牙髓中可见SP、CGRP免疫阳性神经纤维,其数量、深度阳性染色明显多于对照组和涡轮机制洞组。整个牙髓可见广泛分布。

2.2高速涡轮机组:高速涡轮机组的实验对象为同一大鼠的对侧同名磨牙。其牙髓组织中可见SP/CGRP免疫阳性神经纤维变化。在其牙髓组织中可见1～2条阳性纤维。其数量、深度阳性染色明显少于对照组或对照侧。其染色深度以轻中度居多。

2.3空白对照组:空白对照组的大鼠的染色情况与空气喷砂机组相似,在冠髓、根髓都有粗大的呈串珠样的免疫阳性神经纤维伴血管走行。偶尔可见阳性纤维的分支。有时可见免疫阳性神经纤维在冠髓中呈网状分布,在冠髓中部、髓角分布较多。

三组灰度值比较如表1。

3讨论

疼痛是一种主观的心理状态[3]。国际疼痛协会(InternationalAssociationfortheStudyofPain,IASP)将其定义为:由实际或潜在的组织损伤,或被描述为由此种损伤所引起的一种不愉快的感觉上的和情绪上的体验。大多数的疼痛都是由于刺激引起的,神经纤维在任何时候都存在潜在的神经冲动,一旦这种冲动增强或中枢的抑制功能下降,即可被感知为疼痛。无痛治疗技术是指在牙病治疗过程中,能够从主观上或客观上消除或减轻患者疼痛的治疗技术或辅助方法

以往的观点认为[4],P物质(SubstanceP,SP)和降钙素基因相关肽(CalcitoninGene-relatedPeptide,CGRP)是来源于三叉神经节的神经肽。其中SP是一种在牙髓中发现比较早的可以作为神经递质的神经肽。SP可以作用于血管,引起血管扩张和血浆外渗。CGRP是在牙髓中发现的另一种神经肽,其分布同含SP的神经纤维相类似。初级感觉神经受伤害性刺激后产生兴奋性传导,在中枢端释放神经递质,如SP,CGRP等,此为初级感觉神经的传入功能,同时在其外周端也释放神经调节物质,在组织中发挥生理学效应,神经肽就是发挥这种传出功能的介质。SP、CGRP可刺激免疫活性细胞释放组织胺、5-HT等致痛物质,SP本身也可作为致痛物质兴奋感觉神经末梢[5];另外,SP、CGRP的大量释放导致牙髓组织血管扩张、浆液渗出、牙髓组织内压升高和牙髓神经末梢的兴奋性增高。但亦有研究证实伤害性刺激对牙髓组织中的SP、CGRP免疫阳性纤维表达呈双相性影响[6]:轻度牙髓损伤引起CGRP免疫阳性染色增强,重度牙髓损伤使CGRP免疫阳性染色消失或减弱。急性炎症早期SP、CGRP免疫阳性纤维消失,急性炎症后期、慢性炎症和长期损伤引起牙髓组织SP、CGRP免疫阳性增强,这与笔者的实验结果相一致。新近的观念认为[7],任何刺激都可以引起牙髓神经末梢释放SP,CGRP等神经肽。机械损伤性刺激可以激活牙髓神经的传出功能,牙髓神经释放的SP、CGRP增多,使牙髓组织中CGRP免疫阳性神经纤维及SP免疫阳性神经纤维减少。有学者认为,无感觉神经支配的牙比有神经支配牙更容易坏死。提示神经肽在牙髓组织防御及修复反应中发挥着重要的作用。

正常大鼠第一磨牙牙髓组织中含有丰富的CGRP免疫阳性神经纤维。粗大的神经纤维束由根尖孔进入,经根髓直达冠髓,在冠髓顶部成牙本质细胞下层,纤维长轴与冠髓顶行排列成网状,大量CGRP免疫阳性神经纤维从网状结构中分出垂直进入牙本质细胞层及牙本质内层。牙颈部和牙根部较少见到成牙本质细胞下CGRP免疫阳性纤维的网状分布。

本实验中通过免疫组织化学法观察到空气喷砂技术制洞组的牙髓组织SP/CGRP免疫阳性神经纤维相对于高速涡轮机组呈强阳性表达,即空气喷砂制洞组牙髓组织中CGRP免疫阳性纤维及SP免疫阳性神经纤维增多,其合成的SP、CGRP相对来说也较多,据此可推测牙髓神经释放的SP、CGRP相对较少。

一般认为神经释放SP、CGRP等神经肽,作用于淋巴细胞促进免疫反应,作用于巨噬细胞,使巨噬细胞释放各种细胞因子,并引起中性粒细胞的粘附、游走和趋化,参与免疫、炎性防御及修复反应[8-10]。根据这一理论可以推测出如下结论:空气喷砂技术与高速涡轮机在制备相同深度的洞型时,均可以使牙髓组织受到刺激,免疫阳性神经纤维增多,神经肽合成增多,从而释放SP、CGRP进入牙髓组织中,但是由于空气喷砂技术对牙髓组织的刺激损伤较小,虽然引起SP/CGRP免疫阳性神经纤维合成SP、CGRP,但是其中只有少量进入牙髓组织中,所以相对高速涡轮机制洞组来说,其引起的炎症较少,不会引起大量的细胞因子的修复作用;而且作为神经递质,传导痛觉信息较少,在免疫组织染色中,可见SP、CGRP的免疫阳性神经纤维染色相对增强。然而,空气喷砂技术在开髓时对牙髓组织的刺激是否较高速涡轮机要小,还需要具体的实验依据来证实。

本研究结果显示,空气喷砂制洞过程中,牙髓神经合成SP、CGRP增多,但是只有少量神经肽进入牙髓,空气喷砂技术在制洞的过程中对牙髓组织的刺激相对较小,可能导致疼痛阈值升高。但是其具体的作用机制还有待于进一步的研究。

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免疫组织化学技术范文

【关键词】肿瘤;病理诊断技术;研究进展

细胞病理学创建至今已达150年左右，在此期间，生命科学取得了日新月异的发展，尤其是在近20年，现代生物化学、免疫学及分值生物学等学科得到突飞猛进的发展。电子显微镜的发明使得传统病理学诊断技术从细胞水平向亚细胞结构深入，免疫学知识与病理学不断融合，产生了免疫组织化学技术。另外，计算机技术在组织细胞图像处理中的运用，产生了定量细胞病理学。现代病理学采集了众多学科知识与技术，对肿瘤病理诊断具有重要意义。肿瘤病例诊断的准确性对医师制定治疗方案具有重要影响，同时也在一定程度上影响了医师对患者预后的判断，肿瘤病理诊断技术在临床中发挥的作用越来越重要。

1.肿瘤病理诊断技术分类

1.1电镜技术

电镜技术已经广泛应用于肿瘤的诊断中，且掌握了大多数肿瘤的超微结构及诊断要点。张宏波[1]在研究中指出，在电镜下可区分光镜较难区分的肉瘤及癌、腺癌及低分化鳞癌、各种恶性梭形肿瘤、神经内分泌肿瘤等，另外，一些未分化或分化较低的肿瘤在电镜下也无法确诊，需配合免疫组化等方法弥补电镜诊断的不足。

1.2免疫组织化学技术

近年来，免疫组化技术的快速发展使肿瘤病理诊断发生了巨大的变化，染色方法由ABC、PAP等发展为敏感性更高的免疫金银法[2]。李金明[3]认为针对不同类型的肉瘤和癌、中枢和外周神经肿瘤、神经内分泌肿瘤、间皮瘤等特异性较高的单克隆抗体，免疫组织化学技术在极大程度上提高了肿瘤病例诊断的准确性。目前，临床肿瘤诊断通常采用细胞骨架中的中丝蛋白检测，包括上皮性肿瘤的细胞角质蛋白等。李小康[4]认为，随着大量病例的积累，以往临床上认为对某些肿瘤或组织具有特异性的标记物，包括上文所说的中丝，特异性也不明显，原因在于无论从哪种胚叶来源的肿瘤，因基因表达的变异，均存在多分化的潜能，也可出现上皮细胞向间叶细胞化生，或间叶细胞向上皮细胞化生等不同细胞间相互转化的现象，起源于同一胚叶的不同细胞可进行相互转化，因此，有可能出现不同类型的中丝同时表达的现象，使得诊断的难度加大。临床上已经了解多种原因可造成免疫组化染色的假阳性或假阴性。霍兰茹[5]等人为，对免疫组化不可过度迷信，对染色结果的判断需持更慎重的态度，并强调充分结合光镜常规染色切片观察的重要性。以往临床认为免疫组化技术可取代电镜技术，现对免疫组化技术持中肯态度，认为其需与电镜技术互相补充。

1.3细胞增殖活性测定

细胞增殖周期的概念对肿瘤学理论及实际工作具有重要意义，从肿瘤病理研究来看，对肿瘤细胞增殖活性的研究与肿瘤良恶性的甄别、复发和转移能力及预后等有着密切关系。目前用于测定细胞增殖活性的方法有很多，如S期3H标记胸腺嘧啶脱氧核苷掺入技术、核分裂计数等。流式细胞术主要用于肿瘤细胞DNA含量的测定，以确定肿瘤的倍体术及细胞增殖活性。李新忠[6]认为，绝大部分良性肿瘤为二倍体，极少部分为非整倍体，恶性肿瘤多为非整倍体，高恶性肿瘤与低恶性肿瘤相比，非整倍体更为常见，由此可见，细胞增殖活性与恶性肿瘤的组织学分级相关，并可用该方法判断预后。核分裂计数是目前为止临床上最简而易行的判断肿瘤增殖活性的方法，对许多肿瘤的良恶区别及病理诊断具有重要意义，同时于组织学分级及预后联系密切。宋艳华[7]等认为核分裂计数可有效区分平滑肌瘤及平滑肌肉瘤，因此需对核分裂计数进行统一标准，可采用体视学原理进行核分裂计数。

1.4激素受体检测

肿瘤病例中，采用最多的是孕激素受体及雌激素受体的检测，可确定乳腺癌的预后及治疗方法的选择。以往临床上孕激素受体及雌激素受体的检测方法多以生化或组化方法，自从雌激素及孕激素受体单克隆抗体生产后，可采用免疫组化的方法确定孕激素及雌激素受体。韦敬[8]等人为乳腺癌分化越差，合成孕激素及雌激素的能力则越弱，孕激素与雌激素受体阳性率则越低，预后就越差。孕激素及雌激素阳性率高的乳腺癌可加用内分泌治疗从而获得良好的治疗效果。同时检测乳腺癌KI-67阳性率及雌激素阳性率可判断乳腺癌预后及选择治疗方案，采用KI-67测得癌细胞增殖较高，说明分化低、恶性程度较高，因此雌激素阳性率较低。以往临床上采用的抗雌激素抗体为H222，现发现新的抗体ID5，可稀释后使用，减少了检测的费用，且不受固定时间的影响，敏感性较高，值得临床推广。

1.5图像分析技术

临床上长期以来病例观察多以半定量或定性描述为主，使得肿瘤病理诊断、分型及分级等发生困难，也较难进行大系列的统计分析研究。图像分析技术在形态学领域的应用产生了形态测量学，为解决肿瘤病理诊断、分型及分级等困难带来了福音。在肿瘤病理学中，平面测量学技术是使用最为广泛的技术，也被称为图像细胞测量术[9]（ImageCytometry，ICM）。张亚娟[10]等在研究中提出，图像细胞测量术主要用于形态参数的测量分析、细胞核DNA倍体状态的图像分析及显色反应产物的图像分析。肿瘤细胞具有组织结构及细胞异型性，用ICM对细胞的核周长、核面积及核直径等进行测定，可更加客观的区分癌及癌前改变、肿瘤的病理组织学分级及良恶性肿瘤等。流式细胞术可对细胞核DNA进行测量，但是其无法进行形态学分析，可能忽略DNA异常的小细胞，加上混入样本的非肿瘤细胞干扰的结果，对某些实际上已有DNA倍体异常的病例得出假阴性的诊断。孙雪英[11]认为，ICM可依据细胞形态对异常细胞进行选择性测定，从而弥补了流式细胞术的缺陷，用ICM对DNA倍体状态进行测定可得出更加精确的组织学分级。ICM还可用于细胞化学、免疫细胞化学的显色反应产物定量分析。朱通伟[12]等认为，ICM可对细胞增殖活性、凝集素受体及癌基因产物等进行定量分析对肿瘤病理研究及实际应用具有重要价值。

1.6分子生物学技术

近年来，分子生物学技术在肿瘤病理研究领域引起了一场革命。有研究中认为，在核酸分子杂交技术、DNA重组技术等基础上发展的多聚酶链反应-单链构型多态性分析技术[13]等在肿瘤病理诊断中的应用给肿瘤病因学及发病学、基因诊断及治疗等方面的研究带来了巨大的发展。赵丽霞[14]等认为，分子生物技术对肿瘤有无基因突变的检测及判断预后具有重要意义，P53基因突变与乳腺癌、肺癌、结直肠癌等预后关系密切;K-ras基因突变与结肠癌及非小细胞性肺癌的恶性程度及预后密切相关。在肿瘤发病学及病因学方面，目前发现EB病毒与鼻咽癌、鼻腔T细胞瘤等有关，人体免疫缺陷病毒感染可引起淋巴瘤;人类状瘤病毒与食道癌及宫颈癌息息相关，另外，HBV与肝癌的关系正在研究中。

2.小结

总之，近年来，多种跨学科新技术的开展师德肿瘤病理学尤其是诊断性肿瘤病理学有了长足的进步。这不但使病理诊断更加准确，同时可更加客观的对肿瘤组织学分析、恶性程度及预测与后等进行判断，为临床治疗方案的选择提供了更加可靠的依据。另外，也对深入研究肿瘤发病学及病因学创造了更好的条件，对肿瘤的防治起到了积极的作用。各项新技术各有优势及不足，需相互补充达到相得益彰的结果。

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免疫组织化学技术范文篇3

【关键词】抗原修复液；固定时间；免疫组化

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089文章编号：1004-7484（2012）-08-2487-02

随着医学技术和相关领域的不断发展，免疫组织化学技术作为一门新兴的学科出现了。它是一门基于免疫和分子生物学与病理形态学等学科综合的技术，主要是通过已知抗体或抗原进行对实验中的组织细胞中探测的抗原或抗体检测。典型特征包括操作易于实现，准确性高和特异性强，并且能够将形态和机能相互整合。该种技术已在实际中能够进行病理和鉴别诊断，组织胚胎和神经解剖等相关领域的实验研究[1]。通常情况下，只有在正确及时的固定离体组织前提下，免疫组化技术才能得出精确度高的实验结果。但是，由于实际操作中存在大量的影响因素造成不能正确及时的固定离体组织，特别是在进行尸检标本时，对实验的要求更高。本文的研究重点就是考察这些组织是否能够做免疫组化实验，对于不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响。

1材料与方法

1.1一般资料采集本院在2008年1月至2009年12月手术中送检，并且确诊为乳腺浸润性导管癌的26例标本。在实验中，每一标本中选取4块肿块部位，其中的四个时间点分别是：t1，t2，t3和t4。t1，t2，t3和t4分别代表立即固定组，延迟12小时固定组，延迟24小时固定组，延迟48小时固定组。将其中的1块标本马上置于10%的中尔马林液中进行固定，并将实验中的其余3块分别于延迟12、24、48小时后放入10%中尔马林液进行固定。然后对于以上标本固定满24小时后进行脱水、透明、浸蜡和包埋相关操作，再进行切片行HE染色验证肿瘤组织。并且将染色结果为阴性者立即固定组免疫组化，同时不再做与其相应延迟固定组的标本标记染色。

1.2试剂与方法采用的试剂包括：鼠抗人CK7单抗，抗人C-erbB-2，单抗兔抗人ER单抗和鼠及ElivisionTMplus（即用型检测试剂盒和DAB试剂盒均购于福建迈新生物技术开发有限公司）。采用两步法进行免疫组化，即分别用柠檬酸高压热修复和胃酶修复，并且严格按照ElivisionTMplus试剂盒要求的操作步骤进行操作。其中，脱水透明，中性树胶封片，DAB显色和苏木素轻度复染，并且用PBS进行替换一抗作为阴性对照。其中，不同抗原修复液分组：pH为9.0的高温高压EDTA缓冲液修复（A），pH为8.0高温高压EDTA缓冲液修复（B），pH为6.0高温高压柠檬酸盐缓冲液修复（C），pH为9.0微波炉EDTA缓冲液修复（D），pH为8.0微波炉EDTA缓冲液修复（E），pH为6.0微波炉柠檬酸盐修复法（F）。

1.3结果判定进行阳性定位在细胞浆和阳性定位在细胞核的免疫组化切片，将其中具有特征代表的10个在400倍视野中观察，对其中的阳性细胞占整体细胞的比例进行计数如下：计阳性细胞数占整体细胞比例在25%以下记做（±），占整体细胞比例在25%-50%记做（+），占整体细胞比例在50%-75%记为（++），占整体细胞比例在75%以上记为（+++），并且相应的评价分为1，2，3，4分；同样的，以（±），（+），（++）表示染色强度，并且相应的评价分为1，2，3分。最后，将两种记分乘积作为染色效果指数。另外，对阳性定位于细胞膜的免疫组化进行切片，其中的染色效果参照文献[2]标准判定，同样的以符号±，+，++，+++，++++进行评价，并且相应的评价分为1，2，3，4，5分，将两种分数的乘积作为染色效果指数。

1.4统计学分析基于统计软件SPSS13.0进行数字统计处理。在进行统计中，进行随机区间设计的秩和检验，并将检验结果在P

2结果

2.1通过在A-F抗原修复液以及固定时间不同乳癌组织中，CK7的表现结果如下：在乳癌组织中，CK7的阳性显示为黄褐色的颗粒，其定位于细胞浆中，在总共26例标本中立即固定组均阳性。并且，在立即固定组、12小时后固定组、24小时后固定组和48小时后固定组间的染色效果指数差异，有统计学意义（P

2.2通过在A-F抗原修复液以及固定时间不同乳癌组织中，ER的表现结果如下：在乳癌组织，ER的阳性显示为黄褐色颗粒，其定位于细胞核中，在所有的标本中有22例立即固定组标本呈现出了阳性。在立即固定组、12小时后固定组、24小时后固定组和48小时后固定组间的染色效果指数之间的差异P

2.3通过在A-F抗原修复液以及固定时间不同乳癌组织中，C-erbB-2的表现结果如下：在乳癌组织，C-erbB-2阳性显示为黄褐色颗粒，并且阳性定位在细胞膜中，在所有的标本中有18例立即固定组标本呈现阳性。在立即固定组、12小时后固定组、24小时后固定组和48小时后固定组间的染色效果指数之间的差异P

3讨论

由组织病理学基本理论可知，无论在组织切片活着进行电镜大体标本的保存，应该及时适当进行有效的固定。通过这种操作，才能达到使组织和细胞内蛋白凝固并能够在特定位置保留，进而可以防止破坏及自溶内外源性酶，从而最大程度的对组织和细胞的固有形态、结构实施了保护。当出现组织内没未能进行有效的固定时，内外源性酶将能够造成组织细胞结构破坏，甚至使某些特定部位的蛋白向周围扩散并出现降解。在本实验中，通过采用不同抗原修复液，并采用在延迟时间不等的固定组织，进行特定部位的蛋白免疫组化检测，在结果中可以看到特定阳性部位周围有不同的化程度的阳性背景。并且，在进行CK7免疫标记时，癌巢周围阳性背景随着抗原修复液A到F，固定时间的增长而逐渐加深；在进行ER免疫标记过程中，在核阳性减弱的同时出现胞浆的阳性背景；在进行C-erbB-2免疫标记过程中，胞膜阳性同时胞膜两侧均出现阳性背景。并且，从统计学角度，在CK7、ER和C-erbB-2在4组固定时间不等的乳癌组织间的表达效果具有统计意义。

免疫组织化学技术基本原理：基于抗原抗体反应或者组织化学的呈色反应，通过借助显色剂来标记特异性抗体在组织细胞原位，从而能够对相应抗原进行定性、定位和定量诊断。其中，组织固定不理想对于免疫组化染色结果有非常大的关系，其固定的结果程度和抗原保存有直接关系，因此应该进行尽快组织固定。在进行大标本和有包膜的标本实验时，由文献[3，4]应该进行切开固定。在其中的组织细胞不能及时有效固定，就会导致细胞内蛋白破坏降解，甚至导致免疫组化检测失败[5，6]。免疫组化染色中，组织结构的保存和抗原性等的改变程度有多方面的影响因素，主要包括：温度、抗原、固定液的pH值、固定剂种类、灌注速度和进行固定后处理方法等方面。

在本实验中，所选用得CK7、ER和C-erbB-2抗体，进行了在不同抗原修复液，在立即固定、延迟12小时固定、延迟24小时固定和延迟48小时固定的4组乳癌组织中，并且最终标记了细胞浆、细胞核和细胞膜等部位的相应蛋白。通过实验看出，在抗原修复液E和F及在延迟48小时中的不到明确的膜阳性。因此，延迟固定对膜蛋白免疫组化效果的影响更明显。延迟固定大幅弱化了免疫组化效果，其中的原因可能是延迟固定和内外源性蛋白酶对部分蛋白的降解，以及部分蛋白向周围扩散造成。抗原修复液E和F延迟固定太长，不太适宜进行检测，而抗原修复液A、B、C和D可以进行延迟固定组织免疫组化检测。可以得出，尽管在实验中免疫组化效果变差，但是可以分辨出特定部位的阳性结果。因此，对延迟固定组织只要充分固定和选用抗原修复液抗原修复液A、修复液B、修复液C和修复液D可以做免疫组化检测的，同时应注意减少实验延迟固定时间。

综上所述，对于那些客观因素造导致延迟固定标本，在其延迟时间未达到48小时之前，并且没有进行免疫组化辅助诊断，可以选用抗原修复液A、B、C和D进行免疫组化检测。应当注意的，判定检测结果应充分考虑到延迟固定带来的影响。因此，只要通过有效的措施排除了延迟固定产生的不良影响，免疫组化在一定意义上能够起到辅助诊断的作用。

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